Os protagonistas deste episódio são Rebecca Chambers e Billy Coen, e o jogador pode trocar de personagem. Enquanto comanda um deles, o outro passa a agir de forma autônoma, matando os inimigos que estiverem por perto, por exemplo. Alguns dos quebra-cabeças exigem que os dois personagens façam suas ações em locais distintos.
Apesar do nome, "Resident Evil 0" é a quinta versão da série, lançada após "Resident Evil Code: Veronica", originário do Dreamcast. Foi o último capítulo a usar a mecânica de jogo original, mais cadenciada, para dar lugar ao estilo mais dinâmico de "Resident Evil 4". Em "Resident Evil 0", os jogadores participam dos primeiros eventos da série, uma espécie de episódio-piloto, no qual a equipe de Rebecca Chambers é enviada para investigar estranhos acontecimentos em Racoon City, um dia antes do incidente na mansão Spencer.
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